【產(chǎn)品信息】

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號	規(guī)格	有效期
Dil 紅光細(xì)胞膜染色試劑盒	HK2070	100T	一年

【產(chǎn)品簡介】

Dil（又稱DilC₁₈(3)），其化學(xué)全名為1,1`-雙十八烷基-3,3,3`,3`-四甲基吲哚羰花青高氯酸鹽，是一種脂溶性、長鏈二烷基碳菁類熒光染料。該染料的分子量為933.87 g/mol，具有高度的脂溶性，常用于細(xì)胞膜及其他脂質(zhì)生物結(jié)構(gòu)的標(biāo)記。Dil進入細(xì)胞膜后，通過橫向擴散實現(xiàn)雙層脂質(zhì)膜的廣泛染色，形成連續(xù)的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記，便于細(xì)胞形態(tài)和膜動態(tài)的觀察。在脂質(zhì)環(huán)境中與細(xì)胞膜結(jié)合后，熒光強度顯著增強，Dil在激發(fā)光照射下可發(fā)出橙紅色熒光，激發(fā)波長為550 nm，發(fā)射最大波長為564 nm。其性能使其成為活細(xì)胞和固定細(xì)胞膜成像的理想熒光探針。傳統(tǒng)檢測中，可利用標(biāo)準(zhǔn)的TRITC濾光片進行激發(fā)和發(fā)射信號的檢測。Dil染色具有良好的細(xì)胞兼容性，不會顯著影響細(xì)胞的存活率，因此廣泛應(yīng)用于細(xì)胞追蹤、外泌體示蹤以及膜動力學(xué)研究。由其優(yōu)異的脂質(zhì)親和性和穩(wěn)定的熒光性能，使其成為細(xì)胞膜成像和示蹤研究中的重要工具。

本產(chǎn)品Dil 紅光細(xì)胞膜染色試劑盒，集成了優(yōu)化的Dil 細(xì)胞膜染色緩沖液，能夠?qū)崿F(xiàn)快速、穩(wěn)定且高效的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記，極大提升實驗的效率與熒光的亮度與穩(wěn)定性。

【產(chǎn)品組成】

產(chǎn)品貨號	主要成分	產(chǎn)品規(guī)格
HK2070A	Dil 紅光細(xì)胞膜探針	40 μL
HK2070B	Dil 細(xì)胞膜染色緩沖液	10 mL

【儲存與運輸】

干冰運輸；-20℃避光保存，探針避免反復(fù)凍融，有效期 6 個月。

【使用方法】

1. Dil染色工作液配制：

1.1. 將Dil細(xì)胞膜紅色熒光探針與染色緩沖液以 1:250 比例混合稀釋，配制成Dil染色工作液（現(xiàn)配現(xiàn)用）；注意，Dil探針稀釋比可根據(jù)具體情況在 1:250-1:500 進行調(diào)整，以獲得最佳染色效果。

2. 懸浮活細(xì)胞染色：

2.1. 收集懸浮細(xì)胞，以 500-1000 g室溫離心 3-5 min，去除細(xì)胞上清；

2.2. 使用Dil染色工作液重懸細(xì)胞，使細(xì)胞密度在 1-2×10⁶個/mL；

2.3. 置于 37℃避光孵育 5-20 min；建議根據(jù)具體細(xì)胞調(diào)整染色時間，以獲得最佳染色效果；

2.4. 孵育結(jié)束后，500-1000 g室溫離心 3-5 min，吸除Dil染色工作液；

2.5. 用 37℃預(yù)熱的PBS或細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，500-1000 g離心 3-5 min，去除上清；

2.6. 重復(fù) 2.5 步驟一次；

2.7. 流式細(xì)胞儀上機檢測，或?qū)⒓?xì)胞轉(zhuǎn)移至多孔板、細(xì)胞培養(yǎng)皿或者載玻片上，在熒光顯微鏡下觀察。Dil最大激發(fā)波長 550nm，最大發(fā)射波長 564nm。

3. 貼壁活細(xì)胞染色（6 孔板為例）：

3.1. 將細(xì)胞提前以一定密度種植于 6 孔板中；

3.2. 吸除細(xì)胞培養(yǎng)基，用PBS洗滌細(xì)胞 2 次。加入 1 mL Dil染色工作液（其他規(guī)格孔板，

視情況調(diào)整，保證染料覆蓋細(xì)胞）；

3.3. 置于 37℃避光孵育 5-20 min，吸除Dil染色工作液。建議根據(jù)具體細(xì)胞調(diào)整染色時間，以獲得最佳染色效果；

3.4. 用 37℃預(yù)熱的PBS或細(xì)胞培養(yǎng)基，洗滌細(xì)胞 1-2 次；

加入 37℃預(yù)熱的PBS或細(xì)胞培養(yǎng)基，熒光顯微鏡下觀察。Dil最大激發(fā)波長 550nm，最大發(fā)射波長564nm。

4. 固定的貼壁細(xì)胞染色：

4.1. 樣本前處理：

對于細(xì)胞：去除細(xì)胞培養(yǎng)基，PBS洗滌 1-2 次。加入 4%多聚甲醛固定液，室溫固定 10 min。吸除固定液，用PBS洗滌 2-3 次；

4.2. 加入 0.1-0.5% Triton-100（PBS配制）處理細(xì)胞，室溫通透 10 min；吸除通透液，用PBS洗滌 2-3次；

4.3. （可選，免疫熒光標(biāo)記）按照免疫熒光染色的方法進行抗體的孵育或其他染料進行染色。注意抗體孵育過程中的封閉液、抗體稀釋液、洗滌液等不能含有去垢劑；

4.4. 加入適量體積的Dil染色工作液覆蓋細(xì)胞，37℃避光孵育 5-20 min，吸除Dil染色工作液。建議根據(jù)具體細(xì)胞樣本調(diào)整染色時間，以獲得最佳染色效果；

4.5. 細(xì)胞經(jīng)PBS洗滌 2-3 次，然后置于熒光顯微鏡觀察（細(xì)胞需以適量PBS覆蓋）。Dil最大激發(fā)波長550nm，最大發(fā)射波長 564nm。

5. 外泌體熒光標(biāo)記：

5.1. 將提取的外泌體沉淀，用適量Dil染色工作液重懸；

5.2. 將樣品置于 37℃避光孵育 30 min；

5.3. 用 10 倍體積PBS稀釋樣品體積（可選）；

5.4. 按照之前提取獲得外泌體的方案，再一次提外泌體，以去除多余的染料；

5.5. 收集的外泌體沉淀，用PBS重懸，得到Dil標(biāo)記的外泌體?？捎糜谙鄳?yīng)的后續(xù)實驗，例如細(xì)胞攝取。

【注意事項】

1. 熒光染料存在淬滅問題，請注意避光以減緩熒光猝滅。

2. 實驗過程中請避免使用含有甘油或其它有機物的試劑，否則會影響染色效果。

3. 當(dāng)需要固定操作時，樣品宜在 4%多聚甲醛中進行固定，其他不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?dǎo)致熒光背景高。

4. 由于細(xì)胞敏感性和實驗?zāi)康牡牟煌?，探針的稀釋比和孵育時間需根據(jù)實際情況適當(dāng)調(diào)整。

5. 為了您的健康和安全，操作時請穿好實驗服、戴好手套。

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