杭州浩克生物
植物真菌染色——WGA法
2957樣本：葉片，根，莖 保存方法：樣本用卡諾固定液(乙醇：冰醋酸，G1120)固定，常溫運(yùn)輸。夏季高溫時(shí)需加冰袋。 切片：葉片不切片，整體染...
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【產(chǎn)品信息】
| 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| IHC+普魯士藍(lán)（或其他化學(xué)染料） | HKF2034 | 張 | 200元 |
試劑配制
過氧化氫: 將 30%H2O2 用 0.01mol/LPBS?稀釋為 0.003%
DAB?顯色液?: DAB?染液：現(xiàn)配
2%亞鐵氫化鉀: 亞鐵氫化鉀 2g?，100ml?蒸餾水。
2%鹽酸：鹽酸 2ml ，蒸餾水 98ml。
實(shí)驗(yàn)步驟
1?、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-無水乙醇Ⅰ6min-95%Ⅱ6min-85%酒精 6min?，自來水洗，蒸餾水洗 3 遍。
2、普魯士藍(lán)染色：將 2%亞鐵氫化鉀和 2%鹽酸等比例混合，切片入混合液中染色 30min， 蒸餾水洗 2 遍。
3、DAB?染色：DAB 顯色液滴染約 5- 10min，顯微鏡下控制顯色程度，傾去染液用 0.01mol/L 的 PBS?溶液浸洗 1?次，蒸餾水洗 3 次
4?、染核：蘇木素染色 2-3min?，自來水洗，鹽酸水溶液分化2s，自來水洗，氨水水溶液返藍(lán)15-30s，?自來水洗。
5?、脫水封片：切片依次放入無水乙醇I?5min?-無水乙醇II?5min-無水乙醇Ⅲ5min?-二甲苯?Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明，中性樹膠封片。
6?、顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。
結(jié)果判讀：
組織中含有鐵元素的部位呈棕褐色，細(xì)胞核呈淺藍(lán)色，背景呈淺棕色或無色。
注意事項(xiàng)：
1 、普魯士藍(lán) DAB?染液要現(xiàn)配現(xiàn)用。
2 、切片染色前用蒸餾水洗干凈，防止自來水中的鐵離子在染色中反應(yīng)，造成假陽性。
3 、在 DAB?的顯色過程中，每隔約 5min?需要在顯微鏡下觀察顯色效果，由普魯士藍(lán)染出的?弱陽性(即淺藍(lán)色)被 DAB?替代形成棕色或者無藍(lán)色的部位變成棕色即可。
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