杭州浩克生物
原位雜交（FISH單標）
2692服務介紹： 原位雜交原理：原位雜交是指將特定標記的已知序列核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定...
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【產品信息】
| 產品名稱 | 產品貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
| 免疫熒光（六標） | HKF2010 | 張 | 1500元 |
石蠟切片免疫熒光實驗步驟
1、 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-無水乙醇Ⅰ6min -95%酒精6min-85%
酒精6min蒸餾水洗。
2、 抗原修復：組織切片置于盛滿檸檬酸抗原修復液（PH6.0）的修復盒中于微波爐內進行抗原修復，中火8min
?；?min中低火7min，此過程中應防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。
3、 阻斷內源性過氧化物酶：切片加上3%的雙氧水，室溫孵育25min，將玻片置PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。
4、 血清封閉:在組化圈內滴加3%BSA 均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。
5、 加一抗：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內滴加按一定比例稀的抗體覆蓋組織。切片平放于濕盒內4°C孵育過夜。
6、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。
7、 信號放大:將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min 。滴加相對應顏色Flare信號放大試劑，3-5min.將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min 。雙標或者多標的實驗從這一步結束后重復步驟2-7，標記第二個、或者第三個抗體，最后在進入步驟8即可。
8、DAPI復染細胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加
DAPI染液，避光室溫孵育10min。
9、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
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